Чистота пептида 99% — что это значит

Короткий ответ. «Чистота 99%» означает, что на хроматограмме ВЭЖХ основной пик занимает 99% суммарной площади пиков, а на все примеси приходится около 1%. Это относительная чистота среди компонентов, которые видит детектор, а не доля пептида в массе порошка.

Как измеряют. Используют обращённо-фазовую ВЭЖХ: образец проходит через колонку C18 в градиенте вода — ацетонитрил, детектор регистрирует поглощение пептидной связи в ультрафиолете (обычно 214–220 нм). Чистоту считают как процент площади основного пика.

Какие примеси остаются после синтеза

Примесь	Откуда берётся
Укороченные последовательности (делеции)	Не все аминокислоты присоединились на этапах твердофазного синтеза
Не полностью снятые защитные группы	Неполное удаление защит после синтеза
Окисленные формы	Окисление метионина, цистеина, триптофана при синтезе и хранении
Дезамидированные формы	Превращение аспарагина и глутамина при хранении в растворе
Стереоизомеры	Частичная рацемизация аминокислот при синтезе

Что значат уровни 95%, 98%, 99%. Поставщики реагентов обычно выделяют уровни >95% и >98%: чем выше уровень, тем меньше вклад примесей в результат эксперимента. Для одного и того же пептида разница между 95% и 99% — это в пять раз меньше примесей (5% против 1%).

Почему одной цифры мало. ВЭЖХ говорит, насколько основной пик доминирует, но не говорит, что это именно нужная молекула. Идентичность подтверждает масс-спектрометрия: например, теоретическая средняя масса BPC-157 — около 1419,5 Да, KPV — 342,4 Да. Пик 99% без подтверждения массы — это «что-то чистое», но не обязательно заявленный пептид.

Частые вопросы

Значит ли 99%, что во флаконе 99% пептида по массе?

Нет. Это чистота по ВЭЖХ; долю пептида в массе показывает отдельный показатель — содержание пептида.

Может ли чистота снизиться при хранении?

Да, особенно в растворе и при влаге: идут окисление и дезамидирование. Поэтому важны условия хранения.

Где посмотреть чистоту партии?

В COA партии, вместе с хроматограммой.